Asociación del inmunofenotipo linfocitario de sangre periférica con la presencia de linfomas no Hodgkin / Association of peripheral blood lymphoid immunophenotype with presence of non-Hodgkin lymphomas

Introducción: Los cambios en el inmunofenotipo de los linfocitos en los pacientes con linfoma no Hodgkin están asociados con el pronóstico y las respuestas terapéuticas. Sin embargo, no se ha establecido sistemáticamente la asociación con la enfermedad y por tanto su contribución al diagnóstico. Objetivo: Evaluar la asociación del inmunofenotipo linfocitario en sangre periférica con la presencia del linfoma no Hodgkin. Métodos: Se analizaron 31 muestras de sangre periférica de pacientes con diagnóstico confirmado de linfoma no Hodgkin y de 68 individuos sanos como controles, durante el período de 2018 a 2020. Se empleó la citometría de flujo multiparamétrica para el inmunofenotipado. Se calculó el área bajo la curva y el índice de Youden para establecer puntos de corte en los porcentajes linfocitarios. La asociación de los cambios inmunofenotípicos con el linfoma no Hodgkin, se realizó mediante cálculos de Odd ratio. Resultados: El aumento de linfocitos TCD8+ y NKCD56opaco se asoció significativamente con la presencia de linfoma no Hodgkin (OR= 3,4 y 2,9; respectivamente). Por el contrario, la disminución de linfocitos TCD4+, T doble positivo, T doble negativo y NKCD56brillante también se asoció con la existencia de linfoma no Hodgkin (OR= 23,0; 10,7; 6,9 y 15,8; respectivamente). Además, la disminución del índice CD4/CD8 también fue asociada con la enfermedad. Conclusiones: Los cambios encontrados en los inmunofenotipos linfocitarios se asociaron de forma significativa con la presencia del linfoma no Hodgkin, lo cual representa una expresión sistémica de la enfermedad y sugiere su valor diagnóstico(AU)

Introduction: Lymphocyte immunophenotype changes in non-Hodgkin lymphoma patients are associated with prognosis and therapeutic responses. However, its association with the disease has not been systematically established. Therefor its contribution to the diagnosis process. Objective: To assess the association of lymphocyte immunophenotype in peripheral blood with the presence of non-Hodgkin lymphoma. Methods: 31 peripheral blood samples were analyzed from patients with a confirmed diagnosis of non-Hodgkin lymphoma and from 68 healthy individuals as controls, during the period 2018 to 2020. Multiparametric flow cytometry was used for immunophenotyping. The area under the curve and the Youden index were calculated to establish cut-off points in lymphocyte percentages. The association of immunophenotypic changes with non-Hodgkin's lymphoma was made using Odd ratio calculations. Results: The increase in TCD8+ and NKCD56dim lymphocytes from peripheral blood was significantly associated with the presence of non-Hodgkin lymphoma (OR= 3.4 and 2.9, respectively). Oppositely, the decrease in TCD4+, double positive T, double negative T and NKCD56bright lymphocytes was associated with the existence of non-Hodgkin lymphoma (OR= 23.0, 10.7, 6.9 and 15.8, respectively). Therefore, the decrease in the CD4/CD8 rate was also associated with the disease. Conclusion: The changes found in these lymphocytic immunophenotypes were significantly associated with the presence of non-Hodgkin lymphoma, which represents a systemic expression of the disease and suggests its diagnostic value(AU)

Diagnóstico por citometría de flujo de paciente con leucemia linfoide crónica / Flow cytometry diagnosis of a patient with chronic lymphocytic leukemia

Introducción: La citometría de flujo es una técnica de avanzada, objetiva y altamente sensible que permite el análisis y la cuantificación simultánea de múltiples parámetros celulares, muy utilizada en el estudio de la leucemia linfoide crónica, entidad caracterizada como un trastorno proliferativo maligno de linfocitos de aspecto maduro e incompetentes. Objetivo: Describir la estrategia de diagnóstico del inmunofenotipaje por citometría de flujo de la leucemia linfoide crónica. Métodos: Se analizó una muestra de médula ósea para la citometría de flujo de un paciente con sospecha clínica y morfológica de la leucemia linfoide crónica. El inmunofenotipaje celular se realizó con el empleo de anticuerpos monoclonales dirigidos contra los antígenos de diferenciación linfoides B y T. Se procedió a la lectura de la muestra en un citómetro GALLIOS, Beckman Coulter y los datos obtenidos se analizaron con el empleo del programa informático Kaluza. Resultados: Los antígenos con expresión positiva fueron el CD19 (99,94 por ciento), CD20 (81,56 por ciento), CD5 (80,25 por ciento), así como la coexpresión de CD5+/CD19+ (96,56 por ciento), CD5+/CD20+ (80,56 por ciento), CD19+/CD20+ (84,86 por ciento), CD23 (62,65 por ciento), CD49d (65,18 por ciento), CD38 (52,17 por ciento). Se encontró monoclonalidad de la cadena ligera k en un 44,27 por ciento. La expresión de los antígenos CD3, CD4, CD8y CD25 resultó negativa. Conclusiones: La estrategia diagnóstica propuesta permitió identificar los antígenos más frecuentemente expresados en pacientes con leucemia linfoide crónica, así como la coexpresión de los mismos y la monoclonalidad de la cadena k, los cuales son marcadores celulares que permiten realizar el diagnóstico inmunofenotípico de la leucemia linfoide crónica, por citometría de flujo(AU)

Introduction: Flow cytometry is an advanced, objective, highly sensitive technique for the simultaneous analysis and quantification of multiple cellular parameters. This technique is very common in the study of chronic lymphocytic leukemia, a condition defined as a malignant proliferative disorder of mature, incompetent lymphocytes. Objective: Describe the diagnostic strategy for flow cytometry immunophenotyping of chronic lymphocytic leukemia. Methods: Flow cytometry testing was performed of a bone marrow sample taken from a patient with clinical and morphological suspicion of chronic lymphocytic leukemia. Cell immunophenotyping was based on monoclonal antibodies targeted against lymphoid differentiation antigens B and T. The sample was read in a GALLIOS Beckman Coulter cytometer, and the data obtained were analyzed with the software Kaluza. Results: Antigens with a positive expression were CD19 (99.94 percent), CD20 (81.56 percent), CD5 (80.25 percent), as well as the co-expression of CD5+/CD19+ (96.56 percent), CD5+/CD20+ (80.56 percent), CD19+/CD20+ (84.86 percent), CD23 (62.65 percent), CD49d (65.18 percent), CD38 (52.17 percent). Monoclonality of the k light chain was present in 44.27 percent. Expression of antigens CD3, CD4, CD8 and CD25 was found to be negative. Conclusions: The diagnostic strategy proposed made it possible to identify the antigens most frequently expressed in patients with chronic lymphocytic leukemia, as well as their co-expression and the monoclonality of the k chain, all of which are cell markers allowing flow cytometry-based immunophenotypical diagnosis of chronic lymphocytic leukemia(AU)

Diseño y optimización de un tubo policromático de citometría de flujo para inmunofenotipo linfocitario periférico / Design and optimization of a polychromatic tube of flow cytometry for peripheral lymphocyte immunophenotype

Introducción: La citometría de flujo permite la cuantificación de las subpoblaciones de linfocitos con una elevada sensibilidad, especificidad y objetividad. Estas ventajas solo se logran con un proceso laborioso de diseño individualizado y controlado para cada experimento. Objetivo: Diseñar un protocolo de un solo tubo policromático de citometría flujo para inmunofenotipo linfocitario periférico. Métodos: Se realizó un estudio experimental in vitro con muestras de sangre periférica obtenidas de tres voluntarios sanos, en el Centro Nacional de Genética Médica, en marzo de 2019. El tubo se compuso de seis marcadores de linaje para identificar linfocitos B, T, natural killer y natural killer T. Se desarrolló un protocolo de lisis de hematíes sin lavado. Se emplearon anticuerpos monoclonales conjugados con fluorocromos. El punto óptimo de concentración correspondió al mayor índice de tinción y conservación de los porcentajes de positividad de cada población. Se realizó la construcción progresiva del tubo y se propuso una estrategia lógica de secuencia de ventanas para el análisis de datos. Resultados: Los marcadores seleccionados permitieron realizar correctamente el inmunofenotipo linfocitario periférico. En los cinco puntos de titulación se observaron buenas discriminaciones entre las señales positivas y negativas, excepto para el anti-CD56 que presentó una tendencia decreciente del índice de tinción. El volumen total de conjugados requeridos para la determinación de los 6 antígenos fue de 3,75 μL por tubo. Conclusiones: Se obtuvo un tubo policromático que permite el inmunofenotipo periférico de forma rápida y precisa por seis antígenos linfocitarios simultáneamente, con el empleo de pequeños volúmenes de conjugado y sangre(AU)

Introduction: Flow cytometry allows quantification of lymphocyte subpopulations with high sensitivity, specificity and objectivity. These advantages are only achieved through the hardworking process of individualized and controlled design for each experiment. Objective: To design a flow cytometry protocol of a single polychromatic tube for peripheral lymphocyte immunophenotype. Methods: An experimental in vitro study was carried out, in March 2019, with peripheral blood samples obtained from three healthy volunteers, at the National Center for Medical Genetics. The tube was made up of six lineage markers for identifying natural B and T lymphocytes, natural killers and natural killer T cells. A protocol was developed for red blood cell lysis without washing. Fluorochrome-conjugated monoclonal antibodies were used. The optimal point of concentration corresponded to the highest staining index and preservation of the positivity percentages of each population. Progressive tube construction was performed and a logical window sequence strategy was proposed for data analysis. Results: The chosen markers allowed to carry out correct peripheral lymphocyte immunophenotype. Good discriminations between positive and negative signals were observed at the five titration points, except for anti-CD56, which presented a decreasing trend in the staining index. The total volume of conjugates required for determination of the six antigens was 3.75 μL per tube. Conclusions: A polychromatic tube was obtained that allows to carry out peripheral immunophenotype quickly and precisely by six lymphocyte antigens simultaneously, with the use of small volumes of conjugate and blood(AU)

Aplicaciones de la citometría de flujo en el estudio de los síndromes linfoproliferativos crónicos / Applications of flow cytometry in the study of chronic lymphoproliferative syndromes

Introducción: La citometría de flujo es una técnica de avanzada, objetiva y altamente sensible que permite el análisis y la cuantificación simultánea de múltiples parámetros celulares; es muy utilizada en el estudio de las hemopatías malignas. En los últimos años, ha demostrado ser de gran utilidad en la identificación y la caracterización inmunofenotípica de los síndromes linfoproliferativos crónicos. Estos constituyen un grupo heterogéneo de enfermedades caracterizadas por la expansión monoclonal de células linfoides de aspecto maduro. Objetivos: Analizar los aspectos generales de la aplicación de la técnica de citometría de flujo al estudio y clasificación inmunofenotípica de los síndromes linfoproliferativos crónicos. Métodos: Se realizó una investigación bibliográfica-documental acerca del tema. Se consultaron las bases de datos de SciELO y Pubmed. Análisis y síntesis de la información: Se describen los aspectos técnicos de la citometría de flujo, desde la obtención y procesamiento de las muestras hasta la generación del informe por el citómetro; así como la aplicación de la técnica a la caracterización inmunofenotípica de los síndromes linfoproliferativos crónicos. La citometría de flujo multiparamétrica se ha convertido en uno más de los métodos diagnósticos de este síndrome. Uno de los principales objetivos del estudio inmunofenotípico por citometría de flujo consiste en descartar si esa población de células B es clonal o no. Conclusiones: La citometría de flujo permite el análisis, la interpretación y la clasificación inmunofenotípica de los síndromes linfoproliferativos crónicos. Es una herramienta útil en las que se apoya el diagnóstico y el seguimiento de estos pacientes(AU)

Introduction: Flow cytometry is an advanced, objective and highly sensitive technique that allows simultaneous quantification and analysis of multiple cellular parameters. It is widely used in the study of malignant hemopathies. In recent years, it has proved very useful in the identification and immunophenotypic characterization of chronic lymphoproliferative syndromes. These conditions belong to a heterogeneous group of diseases characterized by monoclonal expansion of mature lymphoid cells. Objectives: To analyze the general aspects of flow cytometry application to the study and immunophenotypic classification of chronic lymphoproliferative syndromes. Methods: A bibliographic-documentary research about the topic was carried out. We consulted the SciELO and Pubmed databases. Information analysis and synthesis: The technical aspects of the flow cytometry are described, from obtaining and processing the samples to the cytometer's generating the report; as well as the technique's application to the immunophenotypic characterization of chronic lymphoproliferative syndromes. Multiparametric flow cytometry has become one of the diagnostic methods for this syndrome. One of the main objectives of the immunophenotypic study by flow cytometry is to rule out whether this population of B cells is clonal or not. Conclusions: Flow cytometry allows the analysis, interpretation and immunophenotypic classification of chronic lymphoproliferative syndromes. It is a useful tool that supports the diagnosis and monitoring of these patients(AU)

Supervivencia de pacientes con linfoma no-Hodgkin y síntomas neurológicos según inmunofenotipo del líquido cefalorraquídeo / Survival in non-Hodgkin´s lymphoma patients with neurological symptoms according to the cerebrospinal fluid immunophenotype

Introducción: Los linfomas no-Hodgkin pueden infiltrar el sistema nervioso central y producir síntomas neurológicos, lo cual incrementa la mortalidad. El diagnóstico de esta infiltración se puede realizar mediante el estudio del líquido cefalorraquídeo por la técnica de citometría de flujo, con una mayor sensibilidad que la citología convencional. Objetivo: Estimar la supervivencia global de pacientes con Linfoma no-Hodgkin y síntomas neurológicos según el inmunofenotipo celular del líquido cefalorraquídeo. Métodos: Se realizó un estudio analítico y prospectivo en 15 pacientes con diagnóstico confirmado de linfoma no-Hodgkin y síntomas neurológicos, con citología negativa del líquido cefalorraquídeo, tratados en el servicio de oncología del Instituto Nacional de Oncología y Radiobiología, durante los años 2017 y 2018. El inmunofenotipo fue caracterizado mediante citometría de flujo multiparamétrica. Resultados: El 60,0 por ciento de los pacientes fue del sexo femenino y el 53,4 por ciento mayor de 60 años. Hubo una mortalidad del 26,7 por ciento. Se realizaron 17 inmunofenotipos, el 58,9 por ciento fue normal, el 23,4 por ciento reactivo y el 17,7 por ciento sospechoso de malignidad. La supervivencia global fue mayor en pacientes con líquido cefalorraquídeo con inmunofenotipo normal (HR. 0.04). Conclusiones: La citometría de flujo pudo discriminar células sospechosas de malignidad, en pacientes cuyas citologías fueron negativas. La presencia en el líquido cefalorraquídeo de células atípicas, de pleocitosis y de un índice de linfocito-monocito alto se asoció con una supervivencia global menor(AU)

Introduction: When non-Hodgkin lymphomas infiltrate the central nervous system increases mortality. The diagnosis of this infiltration can be made by the study of cerebrospinal fluid using flow cytometry, with a higher sensitivity than conventional cytology. Objective: To estimate the relationship between the cellular immunophenotype of the cerebrospinal fluid and the overall survival of patients with non-Hodgkin lymphoma and neurological symptoms. Methods: An analytical and prospective study was conducted in 15 patients with confirmed diagnosis of non-Hodgkin lymphoma and neurological symptoms, with negative cytology of the cerebrospinal fluid. Patients cared at Oncology Department of the National Institute of Oncology and Radiobiology, during the years 2017-2018. The immunophenotype was characterized by multiparametric flow cytometry. Results: 60.0 percent of the patients was female and 53.4 percent older than 60 years. There was an overall mortality of 26.7 percent 17 immunophenotypes were found, 58.9 percent of them was normal, 23.4 percent reactive and 17.7 percent suspected of malignancy. Overall survival advantage was obtained in patients with cerebrospinal fluid with normal immunophenotype (HR 0.04). Conclusions: Flow cytometry could discriminate cells suspected of malignancy, in patients whose cytologies were negative. The presence in the cerebrospinal fluid of atypical cells, pleocytosis and a high lymphocyte-monocyte index were associated with a lower overall survival(AU)

Hallazgos Inmunofenotípicos, Morfológicos y Citogenéticos de las Leucemias Linfoblásticas Agudas en Pediatría / Immunophenotypic, Morphological and Cytogenetic Findings of Acute Lymphoblastic Leukemia in Pediatrics

Introducción: Las leucemias linfoblásticas agudas (LLA) son proliferaciones clónales malignas de células en distintos grados de diferenciación y representan las neoplasias más frecuentes en la edad pediátrica. El objetivo de este estudio es determinar las principales características inmunofenotípicas, biológicas y moleculares de las LLA en nuestro medio. Métodos: Se realiza un estudio retrospectivo, de tipo no experimental, descriptivo, y longitudinal de los pacientes diagnosticados de LLA durante el periodo comprendido entre 2004 a 2009 en el Instituto Oncológico Nacional "Dr. Juan Tanca Marengo" Solca, Guayaquil. Resultados: Se analizaron un total de 316 pacientes, con una edad promedio de 6 años. Por sus características morfológicas fueron clasificados como FAB L1 en 90.5 % de los casos (n=286). En base a su inmunofenotipo 91.8 % (n=290) de los mismos correspondieron a una LLA de fenotipo B y un 8.2 % (n=26) a una de fenotipo T, el con un predominio de la variedad B común. Se reportaron 45 casos de translocaciones, siendo a más común la t(12;21). En relación al cariotipo este se reportó como normal en 229 casos (72.5 %) y se evidenciaron gran variabilidad de alteraciones en el restante 27.5 %, prevaleciendo las hiperdiploidías. Conclusión: Una mejor clasificación y estatificación de los pacientes, por medio de la correlación de los hallazgos inmunofenotípicos, morfológicos y citogenéticos permitirá establecer nuevas estrategias terapéuticas con una mejor sobrevida.

Introduction: Acute lymphoblastic leukemias (ALL) are malignant clonic proliferations of cells at different degrees of differentiation and represent the most frequent neoplasms in pediatric age. The objective of this study is to determine the main immunophenotypic, biological and molecular characteristics of ALL in our environment. Methods: A retrospective, non-experimental, descriptive and longitudinal study of patients diagnosed with ALL during the period between 2004 and 2009 is carried out in the pediatric area of the National Oncology Institute "Dr. Juan Tanca Marengo "Solca, Guayaquil. Results: A total of 316 patients were analyzed, with an average age of 6 years. Due to their morphological characteristics, they were classified as FAB L1 in 90.5% of cases (n = 286). According to their immunophenotype, 91.8% (n = 290) of them corresponded to an ALL of the phenotype B and 8.2% (n = 26) to one of the phenotype T, with a predominance of the common variety B. 45 cases of translocations, the most common being t (12; 21). In relation to the karyotype, this was reported as normal in 229 cases (72.5%) and there was a great variability in the alterations in the rest of 27.5%, with hyperdiploidías prevailing. Conclusion: A better classification and staging of patients, through the correlation of immunophenotypic, morphological and cytogenetic findings, will allow the establishment of new therapeutic strategies with better survival.

Leucemia linfoide crónica de células B: revisión de sus aspectos etiopatogénicos, moleculares y pronósticos / B-cell chronic lymphoid leukemia: a review of its etiopathogenic, molecular and prognostic aspects

La leucemia linfoide crónica (LLC) es una neoplasia maligna que afecta principalmente a pacientes de mediana edad y ancianos. Se caracteriza por la proliferación de linfocitos morfológicamente maduros pero inmunoincompetentes que se acumulan en sangre periférica, médula ósea y tejido linfático. Presenta gran heterogeneidad clínica. Se describen diversos fenotipos, aunque predomina la expansión clonal de células B CD5+CD23+. Los factores pronósticos en la LLC incluyen el subgrupo citogenético, estado mutacional de inmunoglobulina, la expresión de ZAP-70, CD38 y CD49d. El tratamiento se basa en usar modernos algoritmos terapéuticos aprobados, que produzcan mayores respuestas y menores eventos secundarios, en lograr la remisión clínica completa y mejorar la calidad de vida de estos pacientes(AU)

Chronic lymphocytic leukemia (CLL) is a malignancy that mainly affects middle-aged and elderly patients. It is characterized by the proliferation of morphologically mature but immunoincompetent lymphocytes that accumulate in blood, bone marrow and lymphatic tissue. It presents great clinical heterogeneity. Several phenotypes are described, although the clonal expansion of CD5 + CD23 + B cells predominates. Prognostic factors include the cytogenetic subgroup, immunoglobulin mutational status, expression of ZAP-70, CD38, and CD49d. The treatment is based on using modern approved therapeutic algorithms that produce greater responses and minor secondary events, to achieve complete clinical remission and to improve the quality of life of these patients(AU)

Reporte de la Primera Reunión Nacional de Consenso para la Inmunofenotipificación de Leucemias Agudas / Report of the First National Consensus Meeting for the Immunophenotyping of Acute Leukemias

Resumen En 2005 se publicaron recomendaciones para la tipificación de hemopatías malignas en Latinoamérica. Se consideró necesario realizar una reunión nacional para actualizarlas. Se convocaron y reunieron 95 profesionales expertos en el tema para analizar y contrastar alternativas y llegar a un consenso. Se alcanzaron opiniones de consenso en lo relativo a indicaciones, tipos y manejo de muestras, anticuerpos, nomenclatura e informe de resultados para el diagnóstico y seguimiento de las leucemias agudas. Las recomendaciones se describen en este artículo y se hace hincapié en la necesidad de que los laboratorios nacionales se apeguen a ellas.

Abstract Recommendations for the typing of hematological malignancies in Latin America were published in 2005. Carrying out a national meeting to update them was deemed necessary. 95 professional experts on the subject were invited in order to analyze and contrast alternatives and reach a consensus. Consensus opinions were reached regarding indications, sample types and processing, antibodies, nomenclature and reporting of results for the diagnosis and monitoring of acute leukemias. This paper describes the recommendations and emphasizes on the need for national laboratories to adhere to them.

Relación entre hallazgos radiológicos e inmunofenotipos tumorales de pacientes con cáncer de mama / Relationship between radiological findings and immunophenotyped in breast cancer

Resumen OBJETIVO: Evaluar la relación entre los hallazgos radiológicos e inmunofenotipos tumorales de pacientes con cáncer de mama. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio observacional, retrospectivo y transversal, efectuado en el Hospital ABC de la Ciudad de México, entre 2013 y 2017. Se incluyeron pacientes con diagnóstico de cáncer de mama establecido por biopsia percutánea o escisional, que contaran con estudios de inmunohistoquímica e imagen (mastografía, ultrasonido o ambos). Para evaluar la relación entre las características morfológicas de las lesiones observadas en los estudios radiológicos y el inmunofenotipo se utilizó la prueba de χ2. RESULTADOS: Se registraron 182 pacientes. En cuanto a las características de las lesiones se encontró relación significativa entre las masas de morfología irregular con bordes espiculados y las calcificaciones agrupadas con tumores luminales, y entre las calcificaciones de morfología amorfa con los tumores luminales A y las pleomórficas finas con los tumores luminales B. CONCLUSIÓN: Existe relación entre los hallazgos morfológicos por imagen y el inmunofenotipo de los tumores mamarios. Es importante que el médico radiólogo especialista en imagen mamaria conozca esta relación, con la finalidad de proporcionar información de la inmunohistoquímica al momento del estudio diagnóstico de imagen.

Abstratc OBJECTIVE: Establish if there is a relationship between the radiological findings and the immunophenotype of breast cancer. MATERIALS AND METHODS: An observational, cross-sectional, retrospective study realized at the ABC Medical Center, over a period of 4 years, that included patients diagnosed with breast cancer performed by percutaneous or excisional biopsy, with an immunohistochemical study and images (mammography and/or ultrasound). The relationship between the morphological characteristics of the lesions observed in the radiological studies and the immunophenotyped was studied by means of the χ2 test. RESULTS: We included 182 patients, among the characteristics of the lesions we found a significant relationship between the masses of irregular morphology with spiculate edges and the calcifications grouped with luminal tumors; calcifications of amorphous morphology with luminal A and pleomorphic fine tumors with luminal B. CONCLUSION: The results suggest that there is a relationship between the morphological findings by imaging and the immunophenotype of mammary tumors.

Study of body fluid samples using flow cytometry: Six years of experience at the Hospital Universitario San Ignacio - Pontificia Universidad Javeriana, Bogota - Colombia / Estudio de muestras de fluidos corporales utilizando citometría de flujo: seis años de experiencia en el Hospital Universitario San Ignacio - Pontificia Universidad Javeriana Bogotá, Colombia / Estudo de amostras de fluídos corporais utilizando citometria de fluxo: seis anos de experiencia no Hospital Universitário San Ignacio - Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, Colômbia

Abstract Flow cytometry (FCM) was implemented in 2008 at the Pontificia Universidad Javeriana and later at the Hospital Universitario San Ignacio to examine special samples of patients with hematological malignancies and solid tumors other than bone marrow and peripheral blood for diagnosis and monitoring. This study describes the main findings of special sample evaluation over a six-year period. In all, 1070 samples of body fluids from patients with benign and malignant diseases were examined by FCM. These samples were stabilized with TransFixTM and stained with six-color immunophenotyping panels. Samples included cerebrospinal fluid, bronchoalveolar lavage, pleural fluid, pericardial fluid and ascite fluid from patients with acute and chronic leukemia, myelodysplastic syndromes, lymphomas, myeloma, autoimmune diseases, immunodeficiencies and solid tumors, among others. Flow cytometry provided important information for the classification and detection of minimal numbers of tumor cells in leukemia and lymphoma cases. This work represents the first national report describing FCM implementation in special samples for diagnosis and clinical monitoring of patients with malignant and benign pathologies.

Resumen La citometría de flujo fue implementada en 2008 en la Pontificia Universidad Javeriana y posteriormente en el Hospital San Ignacio con el fin de examinar, para diagnóstico y monitoreo, muestras especiales de pacientes con malignidades hematológicas y tumores sólidos, distintos de los de médula ósea y sangre periférica. Este estudio describe los principales hallazgos de la evaluación de estas muestras especiales en un periodo de seis años. En total, se examinaron por citometría de flujo 1070 muestras de fluidos corporales de pacientes con enfermedades malignas y benignas. Estas muestras se estabilizaron con TransFix™ y teñidas con paneles inmunofenotípicos de seis colores. Las muestras incluyeron líquido cefalorraquídeo, lavado broncoalveolar, fluido pleural, fluido pericárdico y fluido ascítico, provenientes de pacientes con leucemia aguda y crónica, síndromes mielodisplásicos, linfomas, mieloma, enfermedades autoinmunes, inmunodeficiencias y tumores sólidos, entre otras enfermedades. La citometría de flujo proporcionó información importante sobre la clasificación y detección de números mínimos de células tumorales en casos de leucemia y linfoma. Este trabajo representa el primer reporte nacional que describe la implementación de citometría de flujo en muestras especiales para diagnóstico y monitoreo clínico de pacientes con patologías malignas y benignas.

Resumo A citometria de fluxo foi implementada em 2008 na Pontificia Universidad Javeriana e posteriormente no Hospital San Ignacio com a finalidade de examinar amostras especiais de pacientes com malignidades hematológicas e tumores sólidos diferentes aos de medula óssea e sangue periférico para diagnóstico e monitoramento. Este estudo descreve as principais descobertas a partir da avaliação de amostras especiais em um período de 6 anos. Se examinaram por citometria de fluxo um total de 1.070 amostras de fluídos corporais de pacientes doenças malignas e benignas. Estas amostras se estabilizaram com TransFix™ e coradas com painéis imunofenotípicos de seis cores. As amostras incluíram fluído cérebro-espinhal, lavado broncoalveolar, fluído pleural, fluído pericárdico e fluído ascético, provenientes de pacientes com leucemias aguda e crónica, síndromes mielodisplásicos, linfomas, mielomas, doenças autoimunes, imunodeficiência, e tumores sólidos, entre outras doenças. A citometria de fluxo proporcionou informações importantes sobre a classificação e detecção de um número mínimo de células tumorais nos casos de leucemia e linfomas. Este trabalho representa o primeiro relato nacional que descreve a implementação de citometria de fluxo em amostras especiais para diagnóstico e monitoramento clínico de pacientes com patologias malignas e benignas.

Estudio de inmunofenotipo por citometría de flujo para el diagnóstico de inmunodeficiencias primarias / Immunofenotype study by flow citometry for the diagnosis of primary immunodeficiencies

Las inmunodeficiencias primarias (IDP) son un conjunto heterogéneo de enfermedades, en su mayoría de origen hereditario o congénito, cuyo diagnóstico requiere de la caracterización inmunológica de poblaciones y subpoblaciones celulares. Esta revisión, describe la metodología más actual a nivel internacional, basada en el proyecto denominado FITMaN (del inglés, Flow Immunophenotyping Technical Meeting at National Institute of Health ) para la caracterización celular que permite definir o avanzar en el diagnóstico correcto de estas entidades utilizando las bondades de la tecnología de la citometría de flujo. También, brinda nuevas opciones de investigación que permiten profundizar en el comportamiento del sistema inmunológico en estas enfermedades y su asociación con la expresión de marcadores moleculares y genéticos de interés(AU)

Primary immunodeficiencies (PID) are a heterogenous group of diseases, mostly hereditary or congenital origin, which diagnosis requires the immunological characterization of cell populations and subpopulations. This review describes the international current methodology, based on the project called FITMAN (Flow Immunophenotyping Technical Meeting at National Institute of Health) for cell characterization that allows defines or forward to correct diagnosis of these entities using benefits of flow cytometry technology. Also, it provides new research options that allow deeper into the behavior of the immune system in these diseases and their association with the molecular expression and genetic markers of interest(AU)

Características citopatológicas de la leucemia aguda en el Hospital de Especialidades Pediátricas de Chiapas, México / Cytopathologic features of childhood acute leukemia at the Hospital de Especialidades Pediátricas, Chiapas, Mexico

Resumen: Introducción: Se desconocen las características citopatológicas de las leucemias agudas en pacientes de Chiapas, México, ya que es una población relativamente aislada con alto índice de consanguinidad, lo cual podría afectar la evolución y la respuesta terapéutica. Métodos: Se clasificaron morfológica, inmunofenotípica y genotípicamente 81 casos de leucemia aguda en pacientes atendidos en el Hospital de Especialidades Pediátricas de Chiapas, indicando riesgo al ingreso y situación al momento del estudio. Los resultados se comparan con información nacional e internacional pertinente. Resultados: Se encontró la siguiente proporción de tipos de leucemia aguda: leucemias B, 75.3%; mieloides, 16%; de células T, 3.7%; B-M, 3.7% y de células NK, 1.2%. Las alteraciones genéticas estuvieron presentes en 40.6% de las B y en 69% de las mieloides. La alteración genética se relacionó con la evolución del paciente a corto plazo en las leucemias tipo B; no así en las mieloides. En las B, los casos con el gen MLL alterado fallecieron en menos de un mes, los casos con la translocación t(1;19)(q23;p13) han tenido buena evolución, y aquellos con la t(12;21)(p13;q22) han tenido mala evolución a medio plazo. La hiperdiploidía se presentó en el 20% de los casos B; el 83% de ellos permanecen en remisión de 1 a 12 meses desde el diagnóstico. El 69% de los casos con leucemias mieloides falleció o abandonó el tratamiento en recaída de 15 días a 37 meses del diagnóstico. Conclusiones: La proporción de los diferentes tipos de leucemia aguda atendidas en el HEP es similar a la encontrada en otras partes del país. Su comportamiento y desenlace está relacionado con la presencia o ausencia de alteraciones genéticas específicas y no específicas.

Abstract: Background: Childhood acute leukemia cytological features are unknown in Chiapas, Mexico. Defining these features is important because this is a relatively isolated population with high consanguinity index, and these aspects could determine differences in responses to treatment and outcome. Methods: Eighty-one childhood acute leukemia cases treated at the Hospital de Especialidades Pediátricas in Chiapas were characterized by morphology, immunophenotype, genotype, initial risk assignment and status at the time of the study. Results: The proportion of leukemic cell types found in this study was B cell, 75.3%; myeloid, 16%; T cell, 3.7% and NK 1.2%. In B cell leukemia, genetic alterations were present in 40.6% of cases and had a specific outcome regardless of initial risk assessment. Cases with MLL gene alteration died within a month from diagnosis. Translocations were present in 17.5% B cases; t(1;19) was present in those with a favorable outcome. The t(12;21) translocation was related to initial remission and midterm relapse and dead. Hyperdiploidy was present in 20% of B cell cases with good outcome. In 38.5%of myeloid cases were translocations and karyotypic abnormalities. Short-term outcome in this group has been poor; 69% have died or abandoned treatment in relapse from 15 days to 37 months after diagnosis. Conclusions: Relative frequency of different types of acute leukemia in patients treated at a tertiary level pediatric hospital in Chiapas, Mexico, was similar to the one found in other parts of the country. Patients' outcome, under a standardized treatment, differs according to the group, the subgroup and the presence and type of genetic alterations.

Morfología e inmunofenotipo de las células plasmáticas en el mieloma múltiple / Morphology and immunophenotype of plasma cells in multiple myeloma

Resumen: el avance en el conocimiento de la fisiopatología del mieloma múltiple ha permitido el acercamiento a la comprensión de su heterogeneidad, en términos del comportamiento clínico, citomorfológico, fenotípico, bioquímico, genético y molecular, lo que contribuye al desarrollo de nuevos tratamientos y al establecimiento de modelos que apuntan hacia una cronicidad de la enfermedad. Los cambios morfológicos de la célula plasmática en el mieloma múltiple indican, principalmente, alteraciones a nivel del núcleo, que orientan a la diferenciación de las células reactivas de aquellas clonales; además, que su inmadurez es de mal pronóstico. Igualmente, la expresión de ciertos marcadores monoclonales, y la ausencia de otros, detectados mediante citometría de flujo, clasifican inmunofenotípicamente a las células neoplásicas del mieloma múltiple, lo que permite considerar esta herramienta como una de las mejores en el diagnóstico y en el manejo de la enfermedad mínima residual. En esta revisión se pretende enfatizar en la importancia de identificar los cambios morfológicos que se dan en las células plasmáticas y su relación con las características inmunofenotípicas en las neoplasias, que tienen una asociación pronóstica importante en el desarrollo del mieloma múltiple. (AU)

Abstract: The advance in the knowledge of the pathophysiology of multiple myeloma has allowed the approach to the understanding of its heterogeneity in terms of clinical, cytomorphological, phenotypic, biochemical, genetic and molecular behavior, contributing to the development of new treatments and the establishment of models that point to a chronicity of the disease. The morphological changes of the plasma cell in the multiple myeloma indicate mainly to alterations at the nucleus level, which orient to the differentiation between reactive cells and clonal cells; also that their immaturity is of poor prognosis. Likewise, the expression of certain monoclonal markers, and the absence of others, detected by flow cytometry, immunophenotypically classify the neoplastic cells of multiple myeloma, which allows to considering this tool as one of the best in the diagnosis and management of minimal residual disease. In this review it is intend to emphasize the importance of identifying the morphological change that occur in plasma cells and their relationship with the immunophenotypics characteristics in neoplasia that have an important prognostic association with the multiple myeloma development. (AU)

Linfoma difuso de células grandes inmunofenotipo "B" en región geniana: reporte de un caso / Diffuse of big cells inmunofenotype B in genian region: report of case

El linfoma difuso de células grandes B (LDCGB) constituye 30 a 40% de los linfomas no Hodgkin (LNH) del adulto, se caracterizan por un patrón de crecimiento difuso reemplazando el tejido linfoide normal y el tamaño de las células es catalogado por el tamaño nuclear, según la actual clasificación de neoplasias hematolinfoides de la OMS. El siguiente reporte presenta un caso de un linfoma difuso de células grandes inmunofenotipo B en regió geniana el cual no es frecuente en dicha región, teniendo como objetivo dar a conocer una variante mas de su localización , manteniendo informado al lector sobre la aparición no frecuente de esta lesión neoplásica. (AU)

Diffuse large B-cell lymphoma (LDCGB) it constitutes 30 to 40% of non-Hodgkin lymphoma(NHL) in adult, are characterized by diffuse growth pattern replacing the normal lymphoid tissue and cell size is listed by the nuclear size, according to the current classification of neoplasms hematolymphoid who. The below report a case of a diffuse large cell lymphoma inmunophenotype b in geniana region which is rare in this region and provide a variant of its location is presented, keeping informed the reader about the are ocurrence of this neoplastic lesion. (AU)

Síndromes mielodisplásicos: una mirada al último decenio / Myelodysplastic syndromes: a look at the last decade

Los síndromes mielodisplásicos, ahora denominados por la Organización Mundial de la Salud como neoplasias mieloides, han sufrido grandes cambios en los últimos años. Se han identificado nuevos elementos en su fisiopatología con influencia en el diagnóstico, pronóstico y terapéutica de estos pacientes. Múltiples y profundos descubrimientos han ocurrido en la biología molecular, la citogenética y el inmunofenotipaje de la enfermedad, que sientan las bases para nuevas terapéuticas, ya en investigación. En este artículo se realiza un resumen de los principales acontecimientos ocurridos en la última década(AU)

Myelodysplastic syndromes, now called as myeloid neoplasms, by the World Health Organization, have undergone great changesin recent years. New elements have been identified in pathophysiology with influence indiagnosis, prognosis and therapy of these patients. Many profound discoveries have occurred in molecular biology, cytogenetics and immune phenotyp in go this disease, which lay the foundation for new therapeutic and researchs. This article summarizes the major developments in the last decade(AU)

Metodología y aplicaciones de la citometría de flujo para el inmunofenotipaje de las leucemias agudas / Methodology and applications of flow cytometry for immunophenotyping of acute leukemias

La citometría de flujo (CMF) es una técnica de avanzada, altamente sensible y automatizada, que se emplea para el inmunofenotipaje de las células normales y leucémicas. En este artículo se muestran los principales aspectos metodológicos a tener en cuenta para un mejor desarrollo e interpretación del inmunofenotipo por CMF, entre los que se encuentran: tipo, cantidad, conservación y transportación de la muestra, uso de anticoagulantes, empleo de anticuerpos monoclonales y fluorocromos, lisado de hematíes, fijación celular, así como la calibración y compensación de la auto-fluorescencia. Finalmente, se exponen las principales aplicaciones de esta metodología para definir el estado de maduración celular leucémico, clasificar las leucemias agudas en distintos subtipos inmunológicos, identificar subgrupos de mal pronóstico y detectar fenotipos aberrantes. Todo lo anterior resulta de gran utilidad para el diagnóstico de la enfermedad mínima residual que permite estratificar a los pacientes en diferentes grupos de riesgo e individualizar el tratamiento antileucémico(AU)

Flow cytometry (FCM) is an advanced, highly sensitive and automated technique used for immunophenotyping of normal and leukemic cells. The main methodological aspects to consider for better development and interpretation of immunophenotyping by FCM are shown in this article. Among them are: type, quantity, storage and transportation of the sample, use of anticoagulants, use of monoclonal antibodies and fluorochromes, erythrocyte lysate, cell attachment, calibration and auto-fluorescence compensation. Finally, the main applications of this methodology are given for defining the state of leukemic cell maturation, acute leukemias rank in different immunological subtypes, poor prognosis subgroups and to identify and detect aberrant phenotypes, which are useful for the diagnosis of minimal residual disease, allowing to stratify patients into different risk groups and thus to identify the anti-leukemic treatment(AU)

Caracterización inmunofenotípica de leucemias agudas diagnosticadas en un Hospital Nivel III en el periodo 2010-2013, Chiclayo-Perú / Immunophenotypic characterization of acute leukemia diagnosed in a level III Hospital in the Period 2010-2013, Chiclayo-Perú

Objetivo: Describir las características inmunofenotípicas de las Leucemias agudas diagnosticadas en el Servicio de Patología Clínica de un Hospital nivel III Chiclayo-Perú durante el periodo 2010 - 2013. Materiales y métodos: Estudio secundario descriptivo transversal realizado en 116 pacientes diagnosticados de leucemias agudas en el Servicio de Patología Clínica de un Hospital nivel III, Chiclayo-Perú durante el periodo 2010 - 2013. Se obtuvo información aplicando una ficha de recolección de datos, a partir de los resultados de citometría de flujo de los pacientes. Resultados: En nuestro estudio se evaluaron 116 pacientes (62 varones y 54 mujeres) diagnosticados de Leucemias agudas Linfoblásticas (LLA) y Mieloblásticas (LMA). La media de edad para todos fue de 27 años (DE ±23). Siendo la LLA la más frecuente con un 58,62% donde predominó la LLA-B con un 54,31, y la LLA-T con un 4,31%. La MA representó el 41,38% con predominio de LMA no promielocíticas con un 33,62% y la LMA promielocíticas con el 7,76%. Los principales fenotipos aberrantes que correspondieron a las leucemias linfoblásticas agudas B fueron: infidelidad de línea (76,2 %) seguido de hiperexpresión (47,6%), fenotipos infrecuentes (36,5%) y asincronismos (7,9%). Conclusiones: En las leucemias linfoides aguda T el fenotipo infrecuente correspondió a 100 % de casos y para las leucemias mieloides agudas promielocíticas el 50,0% presentó hiperexpresión y asincronismos (50,0%); en leucemias agudas no promielocíticas la mayor frecuencia de casos presentaron asincronismos (51,3%), seguido de la hiperexpresión (48,7%) y un 7,7% infidelidad de línea. (AU)

Leucemia congénita / Congenital leukemia

La leucemia congénita constituye una entidad rara que se diagnostica entre el momento del nacimiento y los primeros 30 días de vida. Menos del 1 por ciento de las leucemias de la infancia se diagnostican en el neonato. Se caracteriza por la presencia en un recién nacido, de hepatomegalia, esplenomegalia y lesiones hemorrágicas o infiltrativas en piel. El hemograma completo, el examen de la lámina de la sangre periférica, el aspirado de médula ósea, junto con el inmunofenotipaje y los estudios de biología molecular confirmarán el diagnóstico. El trastorno mieloproliferativo transitorio y las infecciones congénitas constituyen los principales diagnósticos diferenciales. El pronóstico de la enfermedad es sombrío. El tratamiento está basado en regímenes de poliquimioterapia intensiva y el trasplante de progenitores hematopoyéticos constituye una opción terapéutica en un grupo de pacientes

Congenital leukemia is a rare but well documented disease which can be diagnosed on the first 30 days of life. The diagnosis requires a high index of clinical suspicion in a newborn with hepatosplenomegaly and hemorragic or infiltratives cutaneous lesions (red, brown or purple papules or nodules) along with further investigations such as complete blood count, peripheral blood smear, bone marrow aspirate and immunopfenotypic profile. A true congenital leukemia has to be distinguished from other conditions such as a transient mieloproliferative disorder described in Down´s syndrome and congenital infections. The prognosis of neonatal leukemia is dismal. Treatment includes intensive multi-agent chemotherapy and supportive care, being the hematopoietic stem cell transplantation an additional treatment option in a group of patients

Inmunofenotipos aberrantes en leucemias agudas en una población hospitalaria de Buenos Aires / Aberrant immunophenotypes in acute leukemia in a Buenos Aires' hospital population

La citometría de flujo multiparamétrica es el método de elección para la caracterización inmunofenotípica de las células hematopoyéticas clonales presentes en los distintos procesos leucémicos agudos. El objetivo fue analizar la expresión de antígenos de membrana y evaluar la presencia de fenotipos aberrantes en los blastos de pacientes con diagnóstico de leucemia aguda, que permiten el monitoreo de la respuesta al tratamiento. Se revisaron los inmunofenotipos de 364 muestras de pacientes adultos derivadas a nuestro laboratorio en un período de 7 años. El inmunofenotipo se realizó por citometría de flujo con un amplio panel de anticuerpos monoclonales con el que se evaluó la expresión de antígenos de linaje linfoide, mieloide y también antígenos de maduración. De las 364 muestras estudiadas, 60.2% presentaron un fenotipo compatible con leucemia mieloide aguda (LMA), 28.8% con leucemia linfoblástica B (LLA-B), 6.6% con leucemia linfoblástica T (LLA-T) y 4.4% con leucemias agudas poco frecuentes. La presencia de fenotipos aberrantes se observó en 89% de los casos, los fenotipos aberrantes identificados fueron: 1) infidelidad de linaje: LMA (54%), LLA-B (40%), LLA-T (29%); 2) ausencia de expresión antigénica: LMA (21%), LLA-B (35%), LLA-T (70%); 3) alteración de la expresión antigénica: LMA (67%), LLA-B (66%), LLA-T (84%); 4) asincronismo madurativo: LMA (26%), LLA-B (37%) y 5) fenotipo ectópico: LLA-T 96%). El análisis por citometría de flujo multiparamétrica de las leucemias agudas permitió la identificación de fenotipos aberrantes en la mayoría de nuestros pacientes, que son de utilidad para el monitoreo de la respuesta al tratamiento.

Multiparameter flow cytometry (MFC) has become the preferred method for the lineage assignment and maturational analysis of malignant cells in acute leukemias. Multiparametric immunophenotyping analysis allows the detection of aberrant antigen expression and the analysis of heterogeneity and clonality of malignant cells in leukemias. Our objectives were to analyze the membrane antigen expression and to evaluate if the aberrant phenotypes occurrence in blasts cells of patients with acute leukemia is useful in monitoring the response to the treatment. We have retrospectively analyzed the MFC data of 364 samples sent to our laboratory in a 7 years period. For this purpose we have used a large panel of monoclonal antibodies against lymphoid, myeloid and precursors antigens. From the 364 analyzed samples, 60.2% showe d a phenotype compatible with acute myeloid leukemia (AML), 28.8% with B lymphoblastic leukemia (B-LLA), 6.6% with T lymphoblastic leukemia (T-LLA) and 4.4% with rare leukemias. Aberrant phenotypes were found in 86% of the samples. The aberrant phenotypes identified were:1) lineage infidelity AML (54%), B-ALL (40%), T-ALL (29%); 2) absence of antigen expression: AML (21%), B-ALL (35%), T-ALL (70%); 3) altered antigen expression: AML (67%), B-ALL (66%),T-ALL (84%); 4) asynchronous expression: AML (26%), B-ALL (37%) and 5) ectopic phenotype: T-ALL (96%). Multiparameter flow cytometry of acute leukemias allowed identification of aberrant phenotypes in the majority of our patients, that are helpful for monitoring treatment response.